在90年代早期，就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，但是當(dāng)時(shí)的技術(shù)比較落后，給后來(lái)的PCR儀起到了的兩個(gè)關(guān)鍵的作用是：
1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測(cè)PCR產(chǎn)物成為可能。
2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使在一密閉的反應(yīng)管中能實(shí)時(shí)地監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過(guò)程。這兩個(gè)發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展的導(dǎo)致在研究工作中的運(yùn)用。
現(xiàn)在，PCR儀隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，zui終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進(jìn)入平臺(tái)期。因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點(diǎn) 上來(lái)檢測(cè)PCR產(chǎn)物的量，并且由此來(lái)推斷模板zui初的含量。每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明，每個(gè)模板的域值循環(huán)數(shù)值與該模板的起始拷貝數(shù)的 對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，域值循環(huán)數(shù)值越小。
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